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无菌洁净室工程等级：

     无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20〜24摄氏度左右，湿度保持在45%~60%之间。超净台洁净度应达到100级。

无菌室使用注意事项：

     1、无菌室应保持清洁,严禁堆放杂物，以防污染。

     2、严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

     3、无菌室应备有工作浓度的消毒液，如质量分数为5%的甲酚溶液，质量分数为70%的酒精，质量分数0.1%的新洁尔灭溶液等。

     4、无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

     5、需要带人无菌室使用的仪器、器械、器皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

     6、工作人员进人无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手套（或用质量分数为70%的乙醇再次擦拭双手），方可进入无菌室进行操作。

     7、无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30min以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20min。

     8、供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用质量分数为70%的酒精棉球消毒外表面。

     9、每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

     10、吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

     11、接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

     12、带有菌液的吸管、试管、培养皿等器皿应浸泡在盛有质量分数为5%的来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24h后取出冲洗。

     13、如有菌液洒在桌上或地上，应立即用质量分数为5%的石炭酸溶液或质量分数为3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30min,再作处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

     14、凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗,严禁污染下水道。

无菌洁净室工程区域检测规律：

     无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注人融化并冷却至约45T的营养琼脂培养基约15mL。放至凝固后，倒置于30~35尤培养箱培养48h,证明无菌后，取平板3~5个，分别放置工作位置的左、中、右等处。开盖暴露30min后，倒置于30〜35尤培养箱培养48h，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

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