适用于本公司GMP洁净室工程车间的沉降菌的测定和环境的验证。

二、引用标准：GB/T-16293-1996

       药品生产质量管理规范（1998年修订）附录。

三、洁净室等级质量指标：

      微生物洁净室等级：微生物最大允许数沉降菌/皿

      300,000 ≤15

四、微生物洁净室工程沉降菌测试方法：

      1、方法概述

       本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定微生物洁净室工程沉降菌项目是否合格。

      2、洁净室车间所用的仪器和设备

      使用时应严格按照仪器说明书操作。

      恒温培养箱

      必须定期对培养箱的温度计进行检定。

      培养皿

      普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基，基配制方法见附录（标准的附录）。

      3、测试步骤

      采样方法

      将已制备的培养皿按4.1.2的要求放置,打开培养皿,使培养表面暴露0.5h,再将培养皿盖盖上后倒置.

      培养

      全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
      在30℃-35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
      每批培养应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照养。

       菌落计数

       用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
       若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨是仍以2个或2个以上菌落计数。

       4、洁净室工程沉降菌检测注意事项

       1）、测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

       2）、采取一切措施防止人为对样本的污染。

       3）、对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

       4）、由于细菌种类繁多，判别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落并髯注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要进用显微镜鉴别。

       5）、采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

五、洁净室沉降菌测试准备条件

      1、测试状态

      1．1沉降菌测试前，被测试洁净室工程的温间断度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

      1．2 沉降菌测试前，被测洁净室工程已经过消毒。

      1．3 测试状态和静态两种，测试瘃态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测度状态。

      2、测试人员

      2．1 测度人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。

      2．2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

      3、测试时间

      3．1 对单向流，如100级净化房间及层注工作台，测试应在净化系统运行不少于10min后开始。

      3．2 对显而易见单向流，如10000级以上的净化空间。测试应在净化空调正常运行不少于30min后开始。

      4、沉降菌计数

     4．1采样点数目及其布置沉隆重法的最少采样点数可按表1确定

表1最少采样点数目
面积m3     洁净度级别(3000000)
＜10
≥10－           ＜20
≥20-             ＜40
≥40－           ＜100
注:表中的面积,对于单向流洁净室工程,是指送风面积;对于非单向流洁净室工程是指房间的面积。

在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表2.

表2

最少培养皿数

洁净度级别   所需90mm培养皿数(以沉降0.5h计)
3000 000           1

        采样点的布置

       采样点的位置可以同悬浮粒子测试点.

a) 工作区采样点的位置离地0.8m-1.5m左右(略高于工作面)

b) 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样采样点位置的详细规则见附录二

     5、记录

      测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。

      洁净室工程沉降菌测试报告的编写

      6、结果计算

      6．1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

      6．2平均菌落数的计算，见式（1）

                 M1+M2+……Mn
平均菌落数M=-------------------------               (1)
                     n     

式中： M-平均菌落数；
       M1—1号培养皿菌落数；
       M2—2号培养皿菌落数
           MN- n号培养皿总数

       7、结果评定

       用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。

       7．1洁净室工程内的平均菌落数必须低于所迁还定期的评定标准。

       7．2若某洁净室工程内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。